非洲豬瘟！防控？疫苗？
非洲豬瘟(African swine fever, ASF) 是由非洲豬瘟病毒(African swine fever virus, ASFV) 引起豬的一種廣泛出血性高度接觸性疫病，最急性和急性型感染死亡率高達(dá)100%。從目前ASF 全球流行態(tài)勢(shì)及世界各國(guó)防控經(jīng)驗(yàn)來(lái)看，我國(guó)面臨的形勢(shì)異常嚴(yán)峻，急需安全有效的疫苗用于防控該病。
1、非洲豬瘟病毒
ASFV 是非洲豬瘟相關(guān)病毒科(Asfarviridae) 非洲豬瘟病毒屬(Asfivirus) 的唯一成員，也是唯一蟲媒DNA 病毒。ASFV 電子顯微鏡檢測(cè)結(jié)果如圖A 所示，外形似正六邊形，直徑約200 nm。病毒粒子(圖B) 主要由病毒基因組(Genome)、內(nèi)核心殼(Core shell)、內(nèi)膜(Inner envelope)、衣殼(Capsid) 和囊膜(External envelope) 五部分組成。ASFV 耐低溫，但對(duì)高溫敏感，不同溫度條件下存活時(shí)間不同：56 ℃可存活70 min，60 ℃ 可存活20 min，25–37 ℃可存活數(shù)周，在4 ℃條件下可以存活1 年以上，在冷凍豬肉中可存活數(shù)年。ASFV 對(duì)乙醚和氯仿敏感，2%氫氧化鈉、2%–3%次氯酸鈉、0.3%福爾馬林等多種消毒劑均可有效滅活A(yù)SFV。
2、非洲豬瘟的流行與防控對(duì)策
家豬、各種野豬(非洲野豬、歐亞野豬) 和鈍緣蜱屬軟蜱為ASFV 的宿主，其中疣豬等非洲本土野豬和部分鈍緣蜱多為儲(chǔ)存宿主。感染ASFV 的家豬、野豬、軟蜱、受污染的飼料、豬肉制品以及器具(車輛、衣服、靴子、注射器) 等是該病的主要傳染源。豬只主要通過(guò)直接或者間接接觸傳染源而被感染，也可經(jīng)軟蜱叮咬而被感染。已證實(shí)的ASFV 傳播循環(huán)主要有3種：1) 家豬-軟蜱-家豬循環(huán)；2) 家豬-家豬循環(huán)；3) 野豬-野豬循環(huán)。ASFV 在不同的循環(huán)內(nèi)可以持續(xù)存在。
防控ASF 的難點(diǎn)在于：1) ASFV 生物學(xué)特性復(fù)雜。該病毒屬于結(jié)構(gòu)復(fù)雜對(duì)外界環(huán)境抵抗力較強(qiáng)的DNA 病毒。2) 飼養(yǎng)管理水平參差不齊。目前還存在一些傳統(tǒng)的養(yǎng)豬模式，大量豬場(chǎng)生物安全水平較低，甚至缺乏基本的消毒、隔離等措施，相關(guān)從業(yè)人員缺乏防控意識(shí)和技能。3) 國(guó)際旅游和貿(mào)易。隨著國(guó)際間的貿(mào)易、旅游越來(lái)越頻繁，但是缺乏嚴(yán)格的出入境檢驗(yàn)檢疫，致使ASF 的跨地區(qū)傳播成為可能。4) 早期ASF 的監(jiān)測(cè)和防控技術(shù)。ASF 疫區(qū)國(guó)家缺乏有效的綜合防控技術(shù)和國(guó)家層面的根除計(jì)劃，致使疫情不斷蔓延和擴(kuò)散。5) ASF 無(wú)可用疫苗。
總結(jié)巴西、西班牙、俄羅斯防控ASF 的經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)，可以從正反兩方面給我國(guó)防控ASF 諸多啟示。巴西、西班牙成功根除ASF 的經(jīng)驗(yàn)主要有：1) 制定國(guó)家層面的根除計(jì)劃。2) 主動(dòng)研發(fā)ASFV 檢測(cè)技術(shù)；建立起完善高效的ASF 監(jiān)測(cè)防控上報(bào)體系。3) 利用ASF 監(jiān)測(cè)防控上報(bào)體系，在全國(guó)范圍內(nèi)逐步剔除陽(yáng)性豬只，直至無(wú)疫情發(fā)生。俄羅斯未有效防控ASF的教訓(xùn)在于：1) 初期階段診斷失誤導(dǎo)致疫情擴(kuò)散。2) 補(bǔ)償不及時(shí)、不到位，導(dǎo)致部分農(nóng)場(chǎng)主不配合，未真實(shí)上報(bào)疫情及處置情況。3) 未形成全國(guó)范圍的ASF 根除計(jì)劃，防控措施低效。4) 存在大規(guī)模生物安全水平較低的豬場(chǎng)。5) 存在部分將疫區(qū)ASFV 污染的豬肉向無(wú)疫區(qū)販賣的違法行為。
防控ASF 的難點(diǎn)在于：1) ASFV 生物學(xué)特性復(fù)雜。該病毒屬于結(jié)構(gòu)復(fù)雜對(duì)外界環(huán)境抵抗力較強(qiáng)的DNA 病毒。2) 飼養(yǎng)管理水平參差不齊。目前還存在一些傳統(tǒng)的養(yǎng)豬模式，大量豬場(chǎng)生物安全水平較低，甚至缺乏基本的消毒、隔離等措施，相關(guān)從業(yè)人員缺乏防控意識(shí)和技能。3) 國(guó)際旅游和貿(mào)易。隨著國(guó)際間的貿(mào)易、旅游越來(lái)越頻繁，但是缺乏嚴(yán)格的出入境檢驗(yàn)檢疫，致使ASF 的跨地區(qū)傳播成為可能。4) 早期ASF 的監(jiān)測(cè)和防控技術(shù)。ASF 疫區(qū)國(guó)家缺乏有效的綜合防控技術(shù)和國(guó)家層面的根除計(jì)劃，致使疫情不斷蔓延和擴(kuò)散。5) ASF 無(wú)可用疫苗。
總結(jié)巴西、西班牙、俄羅斯防控ASF 的經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)，可以從正反兩方面給我國(guó)防控ASF 諸多啟示。巴西、西班牙成功根除ASF 的經(jīng)驗(yàn)主要有：1) 制定國(guó)家層面的根除計(jì)劃。2) 主動(dòng)研發(fā)ASFV 檢測(cè)技術(shù)；建立起完善高效的ASF 監(jiān)測(cè)防控上報(bào)體系。3) 利用ASF 監(jiān)測(cè)防控上報(bào)體系，在全國(guó)范圍內(nèi)逐步剔除陽(yáng)性豬只，直至無(wú)疫情發(fā)生。俄羅斯未有效防控ASF的教訓(xùn)在于：1) 初期階段診斷失誤導(dǎo)致疫情擴(kuò)散。2) 補(bǔ)償不及時(shí)、不到位，導(dǎo)致部分農(nóng)場(chǎng)主不配合，未真實(shí)上報(bào)疫情及處置情況。3) 未形成全國(guó)范圍的ASF 根除計(jì)劃，防控措施低效。4) 存在大規(guī)模生物安全水平較低的豬場(chǎng)。5) 存在部分將疫區(qū)ASFV 污染的豬肉向無(wú)疫區(qū)販賣的違法行為。
3、非洲豬瘟疫苗研究進(jìn)展
ASFV 雖然早在20 世紀(jì)初就已被發(fā)現(xiàn)，但疫苗研究工作卻滯后40 多年。對(duì)ASFV 感染引起的保護(hù)性免疫認(rèn)識(shí)不清楚，是制約ASF 疫苗研究的主要原因。目前認(rèn)為細(xì)胞免疫和體液免疫在抗ASFV 感染中都具有重要作用。
滅活疫苗：ASF 滅活疫苗是最先開(kāi)始嘗試研究的，但是絕大部分無(wú)保護(hù)作用。細(xì)胞內(nèi)病毒顆粒和細(xì)胞外病毒顆粒表面的蛋白差異巨大，這種差異可能導(dǎo)致這兩種類型病毒顆粒的免疫原性不同，這可能是滅活疫苗不能提供免疫保護(hù)的原因之一。
亞單位疫苗、核酸疫苗：選擇具有保護(hù)作用的抗原基因(p72、p54、p30、CD2v)，利用桿狀病毒系統(tǒng)進(jìn)行表達(dá)。使用p54 和p30 共同免疫豬只，可以提供部分的保護(hù)作用。然而當(dāng)使用p72、p54、p30 共同免疫時(shí)卻不能提供保護(hù)作用。利用桿狀病毒表達(dá)的CD2v 可以誘導(dǎo)針對(duì)ASFV 強(qiáng)毒株的部分保護(hù)。這些抗原基因以及其他ASFV 可能的抗原基因的DNA 表達(dá)文庫(kù)核酸疫苗也在研究之中，這些核酸疫苗免疫效果同亞單位疫苗相似，只能提供部分保護(hù)，有的甚至無(wú)保護(hù)。
病毒活載體疫苗：ASFV 活病毒載體疫苗的研究，目前集中在誘導(dǎo)免疫應(yīng)答方面。通過(guò)選用痘病毒、腺病毒、偽狂犬病病毒等載體表達(dá)ASFV 保護(hù)性抗原基因(p72、p54、p30、CD2v、p12、EP153R)，使用“雞尾酒”式混合免疫或者加強(qiáng)免疫策略，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，免疫豬只可以產(chǎn)生特異性抗體和CTL 反應(yīng)。但這些研究還未涉及免疫保護(hù)試驗(yàn)，其保護(hù)效果有待進(jìn)一步驗(yàn)證。
減毒活疫苗：西班牙和葡萄牙在ASF 流行期間曾使用減毒活疫苗(Live attenuated vaccines，LAV)，但免疫豬只出現(xiàn)了慢性感染被迫棄用。ASF 減毒活疫苗具有毒株特異性，自然致弱和非靶細(xì)胞傳代致弱的LAV 免疫效果迥然不同。目前LAV 存在的殘余毒力、病毒血癥、亞臨床癥狀等安全性問(wèn)題亟需解決。
基因缺失疫苗：ASF 基因缺失疫苗是刪除ASFV 強(qiáng)毒株或者弱毒株的毒力基因(TK、UK、9GL 和CD2v) 或者免疫逃避相關(guān)基因(MGF 和A238L)等，構(gòu)建成疫苗候選株?；蛉笔б呙缈梢蕴峁┩耆Ｗo(hù)，但卻存在殘余毒力，免疫后可引起亞臨床癥狀和病毒血癥等問(wèn)題，阻礙了其商業(yè)化進(jìn)程，是需要著力解決的問(wèn)題。
總的來(lái)說(shuō)，目前的ASF 疫苗都不盡人意，滅活疫苗、亞單位疫苗、核酸疫苗、病毒活載體疫苗對(duì)于ASF的免疫效果并不能達(dá)到理想效果，還需要從ASFV 基礎(chǔ)研究入手，解析ASFV 免疫保護(hù)的分子機(jī)制以及免疫機(jī)制，提高疫苗的保護(hù)率。而減毒活疫苗和基因缺失疫苗作為弱毒性疫苗，所面臨的挑戰(zhàn)有：1) 在細(xì)胞或豬體內(nèi)的遺傳穩(wěn)定性問(wèn)題，是否會(huì)出現(xiàn)毒力返強(qiáng)或遺傳特性改變？2) 毒力基因的鑒定及選擇問(wèn)題。3) 區(qū)別野毒感染與疫苗免疫的鑒別診斷方法。
滅活疫苗：ASF 滅活疫苗是最先開(kāi)始嘗試研究的，但是絕大部分無(wú)保護(hù)作用。細(xì)胞內(nèi)病毒顆粒和細(xì)胞外病毒顆粒表面的蛋白差異巨大，這種差異可能導(dǎo)致這兩種類型病毒顆粒的免疫原性不同，這可能是滅活疫苗不能提供免疫保護(hù)的原因之一。
亞單位疫苗、核酸疫苗：選擇具有保護(hù)作用的抗原基因(p72、p54、p30、CD2v)，利用桿狀病毒系統(tǒng)進(jìn)行表達(dá)。使用p54 和p30 共同免疫豬只，可以提供部分的保護(hù)作用。然而當(dāng)使用p72、p54、p30 共同免疫時(shí)卻不能提供保護(hù)作用。利用桿狀病毒表達(dá)的CD2v 可以誘導(dǎo)針對(duì)ASFV 強(qiáng)毒株的部分保護(hù)。這些抗原基因以及其他ASFV 可能的抗原基因的DNA 表達(dá)文庫(kù)核酸疫苗也在研究之中，這些核酸疫苗免疫效果同亞單位疫苗相似，只能提供部分保護(hù)，有的甚至無(wú)保護(hù)。
病毒活載體疫苗：ASFV 活病毒載體疫苗的研究，目前集中在誘導(dǎo)免疫應(yīng)答方面。通過(guò)選用痘病毒、腺病毒、偽狂犬病病毒等載體表達(dá)ASFV 保護(hù)性抗原基因(p72、p54、p30、CD2v、p12、EP153R)，使用“雞尾酒”式混合免疫或者加強(qiáng)免疫策略，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，免疫豬只可以產(chǎn)生特異性抗體和CTL 反應(yīng)。但這些研究還未涉及免疫保護(hù)試驗(yàn)，其保護(hù)效果有待進(jìn)一步驗(yàn)證。
減毒活疫苗：西班牙和葡萄牙在ASF 流行期間曾使用減毒活疫苗(Live attenuated vaccines，LAV)，但免疫豬只出現(xiàn)了慢性感染被迫棄用。ASF 減毒活疫苗具有毒株特異性，自然致弱和非靶細(xì)胞傳代致弱的LAV 免疫效果迥然不同。目前LAV 存在的殘余毒力、病毒血癥、亞臨床癥狀等安全性問(wèn)題亟需解決。
基因缺失疫苗：ASF 基因缺失疫苗是刪除ASFV 強(qiáng)毒株或者弱毒株的毒力基因(TK、UK、9GL 和CD2v) 或者免疫逃避相關(guān)基因(MGF 和A238L)等，構(gòu)建成疫苗候選株?；蛉笔б呙缈梢蕴峁┩耆Ｗo(hù)，但卻存在殘余毒力，免疫后可引起亞臨床癥狀和病毒血癥等問(wèn)題，阻礙了其商業(yè)化進(jìn)程，是需要著力解決的問(wèn)題。
總的來(lái)說(shuō)，目前的ASF 疫苗都不盡人意，滅活疫苗、亞單位疫苗、核酸疫苗、病毒活載體疫苗對(duì)于ASF的免疫效果并不能達(dá)到理想效果，還需要從ASFV 基礎(chǔ)研究入手，解析ASFV 免疫保護(hù)的分子機(jī)制以及免疫機(jī)制，提高疫苗的保護(hù)率。而減毒活疫苗和基因缺失疫苗作為弱毒性疫苗，所面臨的挑戰(zhàn)有：1) 在細(xì)胞或豬體內(nèi)的遺傳穩(wěn)定性問(wèn)題，是否會(huì)出現(xiàn)毒力返強(qiáng)或遺傳特性改變？2) 毒力基因的鑒定及選擇問(wèn)題。3) 區(qū)別野毒感染與疫苗免疫的鑒別診斷方法。
4、現(xiàn)在沒(méi)有疫苗該怎么做？
在沒(méi)有普及使用的非洲豬瘟疫苗的現(xiàn)在，我們應(yīng)該怎么對(duì)抗非洲豬瘟？我們現(xiàn)在既要保證市場(chǎng)供應(yīng)，又要保證生產(chǎn)安全。所以建議一是種豬場(chǎng)和規(guī)模場(chǎng)凈化生產(chǎn)，尤其是種豬場(chǎng)必須凈化。這兩場(chǎng)需要“健康養(yǎng)殖”和“拔牙清除”雙管齊下。加強(qiáng)營(yíng)養(yǎng)的同時(shí)，一旦檢測(cè)出帶有病毒必須馬上清除凈化。二是肉豬場(chǎng)考慮允許短期帶毒生產(chǎn)。因?yàn)楫?dāng)小豬感染了病毒后，通過(guò)調(diào)整飼料配方，加強(qiáng)營(yíng)養(yǎng)，使它的抵抗力不斷增強(qiáng)能對(duì)抗病毒，它能存活下來(lái)，也就能保障豬肉的供應(yīng)。三是屠宰場(chǎng)取消自檢。屠宰場(chǎng)取消檢測(cè)是因?yàn)楦緵](méi)有這個(gè)必要，肉品供應(yīng)和生豬養(yǎng)殖完全是兩個(gè)概念，加上現(xiàn)在市場(chǎng)上的試劑盒質(zhì)量參差不齊，他們買來(lái)自檢的結(jié)果也不準(zhǔn)確，還不如不檢。
此外，還有兩件事情要注意。第一是要發(fā)展檢測(cè)技術(shù)。一定要注重檢測(cè)，當(dāng)病毒進(jìn)入體內(nèi)的時(shí)候，這時(shí)候再采取措施已經(jīng)晚了，所以要發(fā)展、推廣更加敏感的檢測(cè)技術(shù)。第二是飼料營(yíng)養(yǎng)必須調(diào)整，尤其是蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)。非洲豬瘟是瘟疫，解決疫病最好的法子就是增強(qiáng)機(jī)體抵抗力。豬群健康、抵抗力力強(qiáng)的時(shí)候，并不會(huì)發(fā)生大面積死亡。當(dāng)豬營(yíng)養(yǎng)夠，機(jī)體好的時(shí)候，它是可以對(duì)抗非洲豬瘟的。
對(duì)抗非洲豬瘟是持久戰(zhàn)，在禁抗和非瘟雙重壓力下，提高動(dòng)物體本身的免疫能力才是最根本的防控手段。廣州信農(nóng)豬用植物提取物飼料添加劑——香桂寶，調(diào)整仔豬腸道菌群結(jié)構(gòu)，促進(jìn)動(dòng)物消化吸收，增強(qiáng)機(jī)體免疫能力，幫助豬只抵抗病原入侵，廣州信農(nóng)為客戶提供更多更優(yōu)秀的選擇！
參考資料：王濤, 孫元, 羅玉子, 等. 非洲豬瘟防控及疫苗研發(fā)：挑戰(zhàn)與對(duì)策. 生物工程學(xué)報(bào), 2018, 34(12): 1931–1942.
此外，還有兩件事情要注意。第一是要發(fā)展檢測(cè)技術(shù)。一定要注重檢測(cè)，當(dāng)病毒進(jìn)入體內(nèi)的時(shí)候，這時(shí)候再采取措施已經(jīng)晚了，所以要發(fā)展、推廣更加敏感的檢測(cè)技術(shù)。第二是飼料營(yíng)養(yǎng)必須調(diào)整，尤其是蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)。非洲豬瘟是瘟疫，解決疫病最好的法子就是增強(qiáng)機(jī)體抵抗力。豬群健康、抵抗力力強(qiáng)的時(shí)候，并不會(huì)發(fā)生大面積死亡。當(dāng)豬營(yíng)養(yǎng)夠，機(jī)體好的時(shí)候，它是可以對(duì)抗非洲豬瘟的。
對(duì)抗非洲豬瘟是持久戰(zhàn)，在禁抗和非瘟雙重壓力下，提高動(dòng)物體本身的免疫能力才是最根本的防控手段。廣州信農(nóng)豬用植物提取物飼料添加劑——香桂寶，調(diào)整仔豬腸道菌群結(jié)構(gòu)，促進(jìn)動(dòng)物消化吸收，增強(qiáng)機(jī)體免疫能力，幫助豬只抵抗病原入侵，廣州信農(nóng)為客戶提供更多更優(yōu)秀的選擇！
參考資料：王濤, 孫元, 羅玉子, 等. 非洲豬瘟防控及疫苗研發(fā)：挑戰(zhàn)與對(duì)策. 生物工程學(xué)報(bào), 2018, 34(12): 1931–1942.
